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    菌株凍干粉復蘇流程你會嗎

    2022-07-01 14:55 作者:安桐 來源:上海遠慕生物試劑

    一、安瓿瓶的打開方法

    常見的用于保存菌種凍干粉的安瓿瓶有單層和雙層兩種,如下圖1所示。

    圖1 兩種用于保存菌種凍干粉的安瓿瓶

    圖2 單層安瓿瓶的打開方式

    圖3 雙層安瓿瓶的打開方式

    若雙層安瓿瓶底部的干燥劑(藍色硅膠珠)呈現無色或粉紅色,則表明發生了泄漏,安瓿瓶內已不是真空狀態,此時管內的菌種可能已經無法復蘇。

    如果不是立即對菌種進行復蘇處理,則需要將安瓿瓶存放在2-8℃冰箱中。

    二、菌種復蘇實驗流程

    1、厭氧條件準備

    根據菌株供應商提供的培養信息準備相應的固體和液體培養基,如果是厭氧菌株,準備厭氧倉條件。

    2、菌株復蘇

    打開安瓿瓶,用0.5-1mL液體培養基重懸管內的菌體。若菌種為真菌,則建議將菌懸液轉移至5-6mL無菌水中室溫孵育數小時,孵育時間越長,菌株的活性越高。

    若是進行液體培養,則將菌懸液全部取出,接種至5-6mL液體培養基中。若為固體平板培養,則需要將菌懸液按200μL/板的量接種至固體培養基平板上。

    在合適的條件下進行培養,通常情況下會在2-5天內長菌,少數菌株會需要更長的培養時間。

    3、菌種復蘇后,對菌種進行保存,采用一代測序的方法進行菌種鑒定,來判斷復蘇出來的菌種是否符合預期。

    4、根據老師要求,對復蘇成功的菌株,進行擴大培養。

    5、菌株擴培后,再次進行一代測序,來判斷擴培菌株是否符合預期。

    6、采用qPCR的方法,對擴培的菌株進行拷貝數的定量,根據rrnDB中菌株的拷貝數,進行菌株個數的轉化。如果菌種水平沒有拷貝數信息,那么根據更高一個級別進行轉化。并稀釋或濃縮到老師需要的菌株濃度。

    7、根據需求對菌株進行分裝,如果是厭氧菌株,則在厭氧倉中進行,并獨立包裝,加上吸氧劑抽真空保存。方便老師后繼使用方便。

    8、活菌的運輸:如果菌株中加了凍存試劑,必須采用干冰運輸,老師收到菌株后放在-80℃保存。如果老師指定要求是新鮮菌液,那么采用冰袋運輸,老師收到菌株后放在4℃冰箱保存,并盡快使用掉,不宜在4℃冰箱中長期保存。

    三、注意事項

    1、針對厭氧菌株,以上操作都必須在無氧環境下進行。若在有氧環境下復蘇厭氧菌,會導致菌株的活性會大幅下降,甚至復蘇失敗。

    2、必須在符合相應的生物安全等級的實驗室中,由接受過專業訓練的人員進行以上所有操作。

    3、操作過程中,需要全程做好防護措施。實驗過程中產生的廢棄物必須先滅菌,然后才能丟棄。

    4、致病性的菌株公司不提供相應的服務。

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