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    PBS和D-PBS緩沖溶液的配制方法

    2022-07-07 13:08 作者:安桐 來源:上海遠慕生物試劑
    磷酸鹽緩沖液(簡稱PBS)的是生物化學中常用的一種阻礙溶液pH變化的緩沖溶液,這種由鹽溶液中含有氯化鈉,磷酸鹽,磷酸鹽,氯化鉀和磷酸鉀組成。組份濃度:137 mM 氯化鈉,2.7 mM 氯化鉀,10 mM 磷酸二氫鈉,2 mM 磷酸二氫鉀。本文總結了PBS和D-PBS溶液的配制方法。

    1. 常規PBS磷酸鹽緩沖液

    組成成份:

    磷酸二氫鉀 34 g

    1 mol/L氫氧化鈉溶液 175 ml

    蒸餾水 825 ml

    PH 7.2

    配制:

    先將磷酸鹽溶解于500 mL蒸餾水中,用1 mol/L氫氧化鈉溶液校正pH后,再用蒸餾水稀釋至1000 mL。

    稀釋液:

    取儲存液1.25 mL,用蒸餾水稀釋至1000 mL。分裝每瓶100 mL或每管10 mL,121 ℃高壓滅菌15 min。

    用途:

    主要用于一些化學實驗中不影響實驗反應的情況下調節pH值,以便讓實驗的化學反應在最佳條件下進行。部分用于食品或是飼料行業加工,如食品或者飼料真菌毒素檢驗中Elisa方法的洗板應用或者食品微生物檢驗中的稀釋緩沖液。

    2. PBS Buffer的配制具體步驟

    組份濃度:

    137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4

    配制量:

    1 L

    配制方法:

    (1)稱量下列試劑,置于1 L燒杯中。

    NaCl 8 g

    KCl 0.2 g

    Na2HPO4 1.42 g

    KH2PO4 0.27 g

    (2)向燒杯中加入約800 ml的去離子水,充分攪拌溶解。

    (3)滴加濃鹽酸將pH值調節至7.4,然后加入去離子水將溶液定容至1 L。

    (4)高溫高壓滅菌后,室溫保存。

    注意:

    上述PBS Buffer中無二價陽離子,如需要,可在配方中補充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

    3. D-PBS是杜氏磷酸緩沖液

    全稱為:Dulbecco's Phosphate Buffered Saline

    組分 分子量 濃度 (gm/L) 摩爾濃度 (mM)

    氯化鉀 (KCl) 75 0.20 2.67

    磷酸二氫鉀 (KH2PO4) 136 0.20 1.47

    氯化鈉 (NaCl) 58 8.00 138.00

    磷酸氫二鈉 (Na2HPO4) 142 1.15 8.10

    pH值為7.4。

    (1)杜氏磷酸鹽緩沖液(Dulbecco's Phosphate Buffered Saline,D-PBS)也是一種磷酸鹽緩沖液,與常規PBS的不同之處在于磷酸鹽的含量稍低些,并含有鈣鎂離子。D-PBS主要用于胚胎學方面的研究,多用于胚胎的沖洗液、凍存液和培養液。

    (2)D-PBS配方:氯化鈉8 g,氯化鉀0.2 g,磷酸氫二鈉1.15 g,磷酸二氫鉀0.2 g,氯化鈣0.1 g,含6個結晶水的氯化鎂0.1 g溶于1 L ddH2O中。

    (3)以上配方為含有鈣鎂離子的D-PBS,如不加氯化鈣和氯化鎂,即為無鈣鎂的D-PBS。

    (4)在以上配方的基礎上,還可以加入葡萄糖、丙酮酸鈉等,以更利于培養物的生長。

    D-PBS是杜氏磷酸緩沖液,也是一種磷酸鹽緩沖液,與常規磷酸緩沖液最大的不同點在于磷酸鹽的含量稍低些,根據是否含鈣鎂分為兩種即D-PBS w/鈣 & 鎂和D-PBS w/o 鈣。
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