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    標準品蘆丁的提取及鑒定

    2022-07-08 12:19 作者:安桐 來源:上海遠慕生物試劑
    概述

    蘆?。≧utin)廣泛存在于植物界中,現已發現含蘆丁的植物至少在70種以上,如煙葉、槐花、蕎麥和蒲公英中均含有。尤以槐花米(為植物Sophorajaponica的未開放的花蕾)和蕎麥中含量最高,可作為大量提取蘆丁的原料。蘆丁是由斛皮素(Quercetin)3位上的羥基與蕓香糖(Rutinose)〔為葡萄糖(Glucose)與鼠李糖(Rhamnose)組成的雙糖〕脫水合成的苷。

    蘆丁為淺黃色粉末或極細的針狀結晶,含有三分子的結晶水,熔點為174~178℃,無水物188~190℃。溶解度:冷水中為1:10000;熱水中1:200;冷乙醇1:650;熱乙醇1:60;冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯,不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚,溶于堿而呈黃色。

    蘆丁具有維生素P樣作用。有助于保持及恢復毛細血管的正常彈性,主要用作防治高血壓病的輔助治療劑,亦可用于防治因缺乏蘆丁所致的其他出血癥。

    實驗目的和要求

    1. 實驗目的

    ①通過蘆丁的提取與精制掌握堿-酸法提取黃酮類化合物的原理及操作。

    ②通過蘆丁結構的檢識,了解苷類結構研究的一般程序和方法。

    ③了解UV及NMR在黃酮類化合物結構鑒定中的應用。

    2. 要求

    ①要拿到以下三個化合物:蘆丁、槲皮素、蘆丁的全乙?;衔?。

    ②能夠拿根據化學試驗及UV、NMR數據初步推斷出蘆丁的結構。并對黃酮類化合物的結構測定有一般性的了解。

    試驗方法

    1. 蘆丁的提取與分離(見下圖)

    2. 蘆丁的鑒定

    1)蘆丁的定性反應

    取蘆丁3~4mg,加乙醇5~6ml使其溶解,分成三份作下述試驗:

    A.取上述溶液1~2ml,加2滴濃鹽酸,在酌加少許鎂粉,注意觀察顏色變化情況。

    B.取上述溶液1~2ml,然后滴加2%檸檬酸的甲醇溶液,注意觀察顏色變化情況,在繼續向試管中加入2%ZrOCl2的甲醇溶液,并詳細記錄顏色變化情況。

    C.取上述溶液1~2ml,然后再加入10%α-等體積的萘酚乙醇溶液,搖勻,沿管壁滴加濃硫酸,注意觀察兩液面產生的顏色變化。

    2)蘆丁的紫外光譜解析

    取蘆丁溶于色譜純甲醇中,加入規定的試劑,測定其UV光譜,試解析光譜并初步判斷其結構。

    3) 蘆丁的NMR波譜解析

    A.蘆丁的三甲基硅醚NMR譜的解析

    B.十乙?;J丁的NMR光譜解析

    4)蘆丁水解后糖與苷元的鑒定

    A.水解方法:精密稱取蘆丁1g(±0.01g),加1%硫酸100ml,加熱40min,放冷靜置,過濾。所得沉淀用少許水洗除酸,干燥稱重,計算苷元與糖的重量比。然后用乙醇(95%大約10ml)進行重結晶,即得苷元。

    B.苷元的鑒定:用紙色譜法與對照品對照。

    本實驗講解要點及注意事項

    ①蘆丁提取方法,重點介紹堿-酸法的原理及注意事項。

    ②定性實驗的目的、意義及注意事項。

    ③UV及NMR光譜在蘆丁結構檢識中的應用。
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